Авторы:

ЭЛЬБЕРТ ЛЕОНИД БОРИСОВИЧ
АЛПАТОВА ГАЛИНА АЛЕКСАНДРОВНА
КРУТЯНСКАЯ ГЕРТА ЛЬВОВНА
ЖУРАВЕЛЬ ТАМАРА ФИЛИМОНОВНА

Заявитель:

ИНСТИТУТ ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ

Способ количественного определения вируса в вирусных смесях

Номер патента: 704986
Дата публикации: 25.12.1979
Номер заявки: 2391940


3    704986 -    4
но-покровного агара флаконы перевора—    Контроль на общее содержание вй-
чивают агаровым покрытием вверх и ин- руса в исследуемой поливалентной вак--
кубируют при    температуре 33-37°С.    цине. Три флакона    с культурой зара-
' Рецептура    питательно-покровного    жают разведениями    испытуемой
вакцины",
агара на 100    мл (зависит от природы    как описано выше.    Зараженные
флаконы
вируса и культуры ткани) , мл:    ‘ :    ^ заливают питатёльно-покровным ага-
.Раствор Эрла 10    9    ром, не содержащим имунные типоспе-
Дис Тиллир ов а н на я вода 28    цифические сыворотки. Установленный
(30 мл без имунной    в этом опыте вирусный титр не должен
сыворотки)    '    отличаться более Чем на 20% от сум-
' Смесь имунных Сывороток    мы вирусных титров каждого компонент
двух типов вируса    2    та поливалентной вакцины, установ-
Нормальная бычья сы-    :    :    ленных в основном опыте.
Воротка или обезжиренная    Контроль на специфичность имунных
молога    1,8    сывороток. Каждую примененную в ос-
' Раствор бикарбоната на-    .. новном опыте ймунную типоспецифичес-
трия (7,5%)    8,1    . кую сыворотку или их смесь исследуют
Нейтраль-рот 1/1000    1,5    в рабочем разведении со стандартны-
3%-ный раствор расплав-    'ми вирусами всех серотипов, из кото-
ленного агара ДиФко    50,4    рых состоит испытуемая вакцина. Ви-
Окончательный подсчет блашек про- -- русы применяют в дозе, вызывающей водят на
5 день.    образование 30-50 бляшек во флаконе
Количественное содержание отдель- в отсутствии имунных сывороток. В слу-НЫХ:
вирусных компонентов в 1 мл ис- ... чае гомологичных сочетаний сыворотки
^‘•‘ЙЙё'й^мЩ^дакцины определяется еле-    (сывороток) с вирусом не должно обра-
' дующим образом.    ‘    зовываться бляшек в течение срока на-
ОпредеЛяют среднее количество бля- 25 блюдения. шек в одном флаконе в каждой
опытной    В случае гетерологичных сочетаний
партии, соответственно примененной    сывороток с вирусом количество обра-
имунной типоспецифической сыворотке    эуемых бляшек не должно уменьшаться
или смеси таких сывороток.    более чем на 10% по сравнению с ти- .
Это количество умножают на разве- .30 тром вируса, установленйого в отсут-дение
вакционной пробы и на' обратную ствии имунной типоспецифической сы-величину
объема вирусного инокулята. вЬротки.
Полученная величина обозначается    П р и м е р. Количественное опре-
как число бляшкообразующих единиц    деление Отдельных типов вируса по-
в 1 мл (ВОЕ/мл) и может быть выраже- 35 лиомиелита в живой трехвалейтной вак-на
в абсолютных величинах или числом цине .    ■    ■
10 с соответствующей степенью. Если    Делают десятикратные разведения
необходимо определить содержание в и- вакцины, до 10~5на растворе Эрла или руса
в Одной прививочной Дозе, то по- на среде с 0,5% гидролизата лакталь-лученное
значение делится на количе- 40 бумина. Флаконы с семидневной куль-ствО доз в 1
мл исследуемого матери- турой-почек зеленых; мартыиек заража-ала.    с    ют по
0,1 мл как описано выше, и за-
' ■.    '    ливают питательно-покровным агаром
Данный опыт сопровождается следую-' в который добавляют смеси имунных ти-щими
контроНями.    45 поспецифических сывороток. Для опре-
Контроль на чувствительность куль- 43 деления титра" вируса I типа в трех-туры
Ткани к вирусу'. Три флакона той валентной вакцийе (флаконы 1, 2, 3)
. жё партии культур ткани, что: и'Для    в питательно-покровный агар добавля-
" основного опыта, заражают стандарт-    ют смесь сывороток II и III; типов?
' ными вирусными штаммами тех же типов/, для определения титра вируса II типа
что в исследуемой вакцине.' Титры этих *>и (флаконы 4, 5, 6) — смесь
сывороток /штаммов устанавливают“заранее путем    I и III типов и дЛя
определения тит-
*’ многократного титрований;й 'выведения ! pá вируса III типа (флаконы 7, 8, -
9)— срёднёГо значения. титра. Количество    смесь сывороток II и I типов. Опыт
бляшек., образующихся в стих флаконах, сопровождается всеми необходимыми не
должно отклоняться от заранее ус- 55 контрольными испытаниями, описанны-
тановленного среднего Титра более    ми вышё. Через 5 дней инкубации зачем в 2
раза.    раженных и контрольных культур про-
КонТроль культуры ткани на отсут-:    водят подсчет' бляшек в каждом фла-
ствие бляшкообразующих вирусов-кон-    коне и высчитывают титры вирусов. .
таминаТоВ. Два нёзараженных флакона 60 Предлагаемый способ обеспечивает от той
*е партии культуры ткани за- . высокую чувствительность и точность ливают
питательно-покровным агаром,    определения,
в который не добавляют ймунную типо-    Формула изобретения
специфическую сыворотку (или смесь    Способ количественного определе-
сывороток).    ’    65 ния вируса в Вирусных смесях, вклю-


****** 5 ******

704986

6

чающий заражение культуры ткани, инкубирование ее с последующим нанесением
питательно-покровного агара и определением концентрации вируса по количеству
бляшек, о т л и чающий с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа
и точности определения, культуру ткани заражают вирусной смесью и после ин
кубирования наносят питательно-покровный агар, содержащий антисыворот ки ко
всем вирусам, кроме искомого.
Источники информации,
5 принятые во внимание при экспертизе 1. Руководство по иммунологии. — Под ред.
Вязова О. Е. М., Медицина, 1973, с. 281.
'    Составитель С. Малютина
Редактор А. Вер    Техред н.Бабурка Корректор О. Ковинская
Заказ 7965/29    Тираж 526    Подписйое
ЦНИЙПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий «.
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ГГПП ’ ’Патент’

9

г. Ужгород, ул. Проектная, 4